移動(dòng)界面電泳
是將被分離的離子(如陰離子)混合物置于電泳槽的一端(如負(fù)極),在電泳開(kāi)始前,樣品與載體電解質(zhì)有清晰的界面。電泳開(kāi)始后,帶電粒子向另一極(正極)移動(dòng),泳動(dòng)速度快的離子走在前面,其他離子依電極速度快慢順序排列,形成不同的區(qū)帶。只有個(gè)區(qū)帶的界面是清晰的,達(dá)到完全分離,其中含有電泳速度快的離子,其他大部分區(qū)帶重疊。
等速電泳
是在樣品中加有離子(其遷移率比所有被分離離子的大)和終末離子(其遷移率比所有被分離離子的?。瑯悠芳釉陔x子和終末離子之間,在外電場(chǎng)作用下,各離子進(jìn)行移動(dòng),經(jīng)過(guò)一段時(shí)間電泳后,達(dá)到完全分離。被分離的各離子的區(qū)帶按遷移率大小依序排列在離子與終末離子的區(qū)帶之間。由于沒(méi)有加入適當(dāng)?shù)闹С蛛娊赓|(zhì)來(lái)載帶電流,所得到的區(qū)帶是相互連接的(圖d),且因“自身校正”效應(yīng),界面是清晰的,這是與區(qū)帶電泳不同之處。
電泳基本原理:生物大分子如蛋白質(zhì),核酸,多糖等大多都有陽(yáng)離子和陰離子基團(tuán),稱為兩性離子。常以顆粒分散在溶液中,它們的靜電荷取決于介質(zhì)的H+濃度或與其他大分子的相互作用。在電場(chǎng)中,帶電顆粒向陰極或陽(yáng)極遷移,遷移的方向取決于它們帶電的符號(hào),這種遷移現(xiàn)象即所謂電泳。
電場(chǎng)強(qiáng)度(電勢(shì)梯度Electric field intensity)是指每厘米的電位降(電位差或電位梯度).電場(chǎng)強(qiáng)度對(duì)電泳速度起著正比作用,電場(chǎng)強(qiáng)度越高,帶電顆粒移動(dòng)速度越快。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要,電泳可分為兩種:一種是高壓電泳,所用電壓在500~1000V或更高.由于電壓高,電泳時(shí)間短(有的樣品需數(shù)分鐘),適用于低分子化合物的分離,如氨基酸,無(wú)機(jī)離子,包括部分聚焦電泳分離及序列電泳的分離等。因電壓高,產(chǎn)熱量大,必須裝有冷卻裝置,否則熱量可引起蛋白質(zhì)等物質(zhì)的變性而不能分離,還因發(fā)熱引起緩沖液中水分蒸發(fā)過(guò)多,使支持物(濾紙,薄膜或凝膠等)上離子強(qiáng)度增加,以及引起虹吸現(xiàn)象(電泳槽內(nèi)液被吸到支持物上)等,都會(huì)影響物質(zhì)的分離.另一種為常壓電泳,產(chǎn)熱量小,室溫在10~25℃分離蛋白質(zhì)標(biāo)本是不被破壞的,無(wú)需冷卻裝置,一般分離時(shí)間長(zhǎng)。