組織冰凍切片ROS觀察活性氧實驗報告-上海鄭核

一、實驗器材及試劑

1、實驗器材

名稱 廠家 型號

冰凍切片機 Thermo Cryotome E

載玻片 Servicebio

蓋玻片 江蘇世泰實驗器材有限公司 10212432C

脫色搖床 Servicebio TSY-B

渦旋混合器 Servicebio MX-F

掌上離心機 Servicebio D1008E

移液槍 Dragon KE0003087/KA0056573

組化筆 Gene tech GT1001

冰箱 青島海爾股份有限公司 BCD-192TGN

正置熒光顯微鏡 日本尼康 Nikon Eclipse C1

成像系統(tǒng) 日本尼康 Nikon DS-U3

2、主要實驗試劑

試劑 廠家 貨號 稀釋比

OCT包埋劑 Sakura 4583

PBS緩沖液 Servicebio G0002

ROS染液 Servicebio G1045

DAPI Servicebio G1012

抗熒光淬滅封片劑 Servicebio G1401

二、冰凍切片免疫熒光實驗步驟

1、染色：冰凍切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加ROS染液，避光恒溫箱37°孵育30min。

2、DAPI復染細胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

3、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

4、鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm，發(fā)藍光；FITC激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光；CY3激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光）

三、冰凍切片免疫熒光實驗結(jié)果判讀

DAPI染出來的細胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽性表達為相應熒光素標記的紅光

鄭核生物優(yōu)勢貨源：麥克林全國授權(quán)經(jīng)銷商、TCI、阿拉丁、Abcam、CST、三鷹、索萊寶、SIGMA、alfa、ACROS、WAKO、岸田化學、等試劑；病理實驗的專業(yè)助手，病理切片，HE染色，免疫組化，特殊染色，病理大切片專業(yè)的設(shè)備，有資質(zhì)的人員為大家提供動物組織脫水，包埋，制片，染色等病理科研技術(shù)服務！多組織包埋、切片、he染色、全景掃描

病理分析、masson染色、免疫組化、WB

免疫熒光、RT-PCR、透射電鏡、ELISA

掃描電鏡、生化檢測收費標準私信，真是實驗結(jié)果，公司正規(guī)運營資質(zhì)可驗查，為病理實驗提供有效保障。；優(yōu)勢產(chǎn)品：Roche、BD、santa、R&D、博士德、博奧森、聯(lián)科、華美、南京建成、Thremo、Millipore、Axygen、NEST、四季青、gibco、百靈威、ELK、abways、BI、bioword、affinity、bioss、欣博盛、PAN、同仁、康為、匯力、天根等;