電泳基本原理:生物大分子如蛋白質(zhì),核酸,多糖等大多都有陽離子和陰離子基團,稱為兩性離子。常以顆粒分散在溶液中,它們的靜電荷取決于介質(zhì)的H+濃度或與其他大分子的相互作用。在電場中,帶電顆粒向陰極或陽極遷移,遷移的方向取決于它們帶電的符號,這種遷移現(xiàn)象即所謂電泳。
等速電泳 是在樣品中加有離子(其遷移率比所有被分離離子的大)和終末離子(其遷移率比所有被分離離子的小),樣品加在離子和終末離子之間,在外電場作用下,各離子進行移動,經(jīng)過一段時間電泳后,達到完全分離。被分離的各離子的區(qū)帶按遷移率大小依序排列在離子與終末離子的區(qū)帶之間。由于沒有加入適當?shù)闹С蛛娊赓|(zhì)來載帶電流,所得到的區(qū)帶是相互連接的(圖d),且因“自身校正”效應(yīng),界面是清晰的,這是與區(qū)帶電泳不同之處。
等電聚焦電泳 是將兩性電解質(zhì)加入盛有pH梯度緩沖液的電泳槽中,當其處在低于其本身等電點的環(huán)境中則帶正電荷,向負極移動;若其處在高于其本身等電點的環(huán)境中,則帶負電向正極移動。當泳動到其自身特有的等電點時,其凈電荷為零,泳動速度下降到零,具有不同等電點的物質(zhì)后聚焦在各自等電點位置,形成一個個清晰的區(qū)帶,分辨率。
電泳已日益廣泛地應(yīng)用于分析化學、生物化學、臨床化學、毒劑學、藥理學、免疫學、微生物學、食品化學等各個領(lǐng)域。在直流電場中,帶電粒子向帶符號相反的電極移動的現(xiàn)象稱為電泳(electropho-resis)。1807年,由俄國莫斯科大學的斐迪南·弗雷德里克·羅伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)首先發(fā)現(xiàn)了電泳現(xiàn)象,但直到1937年瑞典的Tiselius建立了分離蛋白質(zhì)的界面電泳(boundary electrophoresis)之后,電泳技術(shù)才開始應(yīng)用。上世紀60-70年代,當濾紙、聚丙烯酰胺凝膠等介質(zhì)相繼引入電泳以來,電泳技術(shù)得以迅速發(fā)展。豐富多彩的電泳形式使其應(yīng)用十分廣泛。電泳技術(shù)除了用于小分子物質(zhì)的分離分析外,主要用于蛋白質(zhì)、核酸、酶,甚至病毒與細胞的研究。由于某些電泳法設(shè)備簡單,操作方便,具有高分辨率及選擇性特點,已成為醫(yī)學檢驗中常用的技術(shù)。